細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講，可培養到40-50代。且細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉染到宿主細胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標志進行篩選，篩選來得到可穩定表達目的蛋白，或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。

最常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)。

多克隆穩轉株的熒光通常強弱夾雜，從感染72小時后開始加入篩選藥物，每隔2天重新換液加入篩選藥物。藥物篩選需至少持續14天，直至顯微鏡下觀察到的熒光細胞比例為100%。

穩定表達細胞株主要應用于以下研究中：

1、需要長期在目的細胞中研究基因功能。通過構建穩定株，可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本，也方便長期的實驗研究；

2、部分蛋白半衰期及長，瞬時RNA只能干擾表達，無法去除已經表達的目的蛋白，通過構建穩定株可以實驗更好的基因干擾效果；

3、瞬轉會引入不可預期的拷貝數表達（往往瞬時表達較高），導致因為人為因素造成實驗結果的不精確，構建穩定株可以幫助篩選到拷貝數適量的細胞進行實驗研究；

4、穩轉株可以用于誘導表達系統的實驗，用于控制基因的時空表達；

5、需要用目的細胞構建動物模型的實驗，往往需要構建成穩定株。

慢病毒幾乎可以感染所有種類的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩定表達，因此，慢病毒常用于制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株。

如何用慢病毒構建穩定表達細胞株：

1、目的細胞的合適抗生素濃度篩選；

2、目的細胞的合適病毒滴度篩選；

3、慢病毒構建與包裝與滴度測定；

4、慢病毒感染；

5、特定抗生素篩選穩轉細胞株；

6、穩轉細胞株鑒定。

穩轉株的構建是一個長時間多平臺合作的項目，有多種因素容易導致穩轉株構建失敗，你都遇到過哪些情況呢？